Das Virus SARS-CoV-2 (früher 2019-nCoV) ist von größtem Interesse, da es für die Coronavirus-Krankheit COVID-19 verantwortlich ist. Die Entwicklung entsprechender Produkte läuft daher derzeit auf Hochtouren. In diesem Zusammenhang möchten wir Ihnen das neu entwickelte COVID-19 (SARS-CoV-2) Triplex RT-qPCR-Detektionskit von Assay Genie vorstellen.
Bei diesem Produkt handelt es sich um ein auf Multiplex-Fluoreszenzsonden basierendes RT-qPCR-Testsystem zum Nachweis von COVID-19. Die Taqman-Fluoreszenzsonde ist ein spezifisches Oligonukleotid, das auf einem Reporter-Quencher-Mechanismus basiert. Bei jeder Sonde ist das 5'-Ende mit einem Fluorophor markiert, während das 3'-Ende mit einem Quencher markiert ist. Wenn die Sonde intakt ist, wird die vom Fluorophor emittierte Fluoreszenz vom Quencher absorbiert und daher kein Fluoreszenzsignal detektiert. Wenn jedoch während der Amplifikation des Templates die Sonde aufgrund der 5'-3'-Exonukleaseaktivität der Taq-DNA-Polymerase abgebaut wird und der Fluoreszenzreporter und der Quencher gespalten und getrennt werden, kann ein Fluoreszenzsignal nachgewiesen werden. Die Entstehung jedes einzelnen Amplikons wird von der Erzeugung eines Fluoreszenzsignals begleitet. Der gesamte PCR-Prozess kann durch die Überwachung der Akkumulation von Fluoreszenzsignalen in Echtzeit verfolgt werden.
| Komponenten | Menge | Inhalt |
| Detektionspuffer | 900 μl × 2 Röhrchen | Puffer, dNTP's,Primer, Sonden |
| Enzym-Mix | 400 µl × 1 Röhrchen | RNase Inhibitor, UDG, Reverse Transkriptase, Taq DNA-Polymerase |
| Positivkontrolle | 250 µl × 1 Röhrchen | RNA-Pseudovirus, das das Zielgen enthält |
| Negativkontrolle | 250 µl × 1 Röhrchen | DEPC-behandeltes Wasser |
Dieses Produkt ermöglicht den Dreifachnachweis in einem einzigen Röhrchen, einschließlich zweier unabhängiger Gene von SARS-CoV-2 und einer internen Kontrolle. Um unspezifische Interferenzen von SARS2003 und BatSARS-ähnlichen Virusstämmen zu vermeiden, wurden spezifische Primer und Sonden zur Detektion der konservierten Region des ORF1ab-Gens bzw. des N-Gens von SARS-CoV-2 entwickelt. Die interne Kontrolle ist gegen das menschliche RNAse P (RNP)-Gen gerichtet. Anhand dieser Negativkontrolle kann zugleich die Nukleinsäureextraktion begutachtet werden. Die Positivkontrolle (SARS-CoV-2-Pseudovirus) dient der Bewertung von Nukleinsäureextraktion und reverser Transkription und somit der Validierung des gesamten Verfahrens und der Reagenzintegrität.